第228章 1oo（六更求月票）（2 / 3）

脸上一一扫过。

“各位，这五十份样本，代表着五十个鲜活的生命，也代表着目前全球医学界对胰腺癌早筛的盲区。”

“我们的任务，是用我们自己搭建的irna早筛模型，从这五十份看似正常的血清中，把那个已经开始悄悄发生变化的数据，给揪出来。”

“成功了，这个模型就是目前世界上唯一能提前两到三年预警胰腺癌的雷达。”

“准备干活。”

所有人立刻行动起来。

实验室进入了最高强度的运转状态。

王晓晴：“水浴锅温度设定37度，准备融化样本。”

陆晓林拿着移液枪，将融化后的血清样本分装进新的离心管中。

江河站在操作台前，亲自负责最关键的提取步骤。

“trizol试剂，准备。”

蔡卓群立刻递上试剂瓶。

江河稳稳地吸取定量trizol，加入血清中，反复吹打裂解。

“室温静置五分钟。”江河看了一眼墙上的挂钟。

五分钟后。

“氯仿。”

加入氯仿，剧烈震荡十五秒，再次静置。

“上离心机。”

“4摄氏度，12000g，15分钟。”

离心机启动。

这十五分钟里，没有人说话。

易向晚盯着离心机上的倒计时，咽了一口唾沫。

程溪瑶和唐培在检查下游的pcr反应液。

“滴——”

倒计时结束。

江河取出离心管。

液体已经清晰地分成了三层。

最上层是无色的水相，含有他们需要的rna。

“开始双重氯仿抽提。”

这正是他之前解决纯度问题的核心技术。

小心地吸取上清液，移入新管。

牺牲了一部分液量以避开中间层的蛋白质污染。

接着，再次加入等体积的氯仿，震荡，离心。

第二次离心结束，江河再次吸取上清液。

“糖原。”

江河伸出手。

王晓晴立刻将准备好的糖原递上。

往水相里滴入5微升浓度为5g/l的糖原作为共沉淀剂。

“异丙醇沉淀，负20度静置二十分钟。”

二十分钟后，再次离心。

倒掉上清液，管底出现了一个微小的白色沉淀团块。

“洗涤。”

加入75乙醇，温和洗涤，离心，弃液。

“风干，加无酶水溶解。”

整个提取过程耗时将近两个小时。

第一批五个样本的rna提取完成。

江河拿着溶解后的样本，走到nanodrop分光光度计前。

滴入1微升样本，放下检测臂。

所有人都围了过来。

屏幕上跳出数据：

浓度：15ng/μl。

a260/280：195。

a260/230：203。

极度纯净的数据。

经历了跨国运输和反复冻融，他们依然靠这套提取工艺拿到了完美的样本。

“提取成功。”江河淡淡地说了一句，“按这个标准，把剩下的样本全部提出来，王教授，准备逆转录。”

“收到。”王晓晴立刻接过样本，走向另一边的操作台。

逆转录过程相对自动化。

利用特定的茎环引物，将极其微量的irna逆转录成cdna。

时间一分一秒地过去。

窗外的天色逐渐暗了下来。

没有人提议吃饭。

所有人，接力完成每一个步骤。

晚上八点。

五十份样本的cdna全部准备就绪。

最关键的一步到来了。

“准备上qpcr机。”江河说。

易向晚和顾亦舟将配制好的pcr反应体系小心翼翼地加入96孔板中。

每一个孔里，都包含着引物、荧光染料、cdna模板和酶。

这套体系，是他们之前在1万倍稀释的极端低浓度下拉出来的。

江河拿起96孔板，放入qpcr仪的反应槽中。

压下盖子。

输入参数。

设定循环程序。

“开始运行。”

机器启动。

检测过程需要两个小时。

这两个小时，对实验室里的每一个人来说，都如同世纪般漫长。

如果扩增曲线是一条平滑的直线，没有起伏，说明患者在两三年前的血液中，并没有这些特异性irna的异常表达。

那就意味着，早筛模型失败。

如果曲线能漂亮